Guía de laboratorio
Cómo se reconstituye un péptido liofilizado en laboratorio
Procedimiento de reconstitución de un sólido liofilizado con diluyente estéril: material, técnica de transferencia, disolución y registro.
Responsable editorial: Pureza.
Información para trabajo en laboratorio con material de investigación. No apto para consumo humano ni veterinario, no es para uso diagnóstico ni terapéutico, y no ha sido evaluado por COFEPRIS.
Procedimiento, paso a paso
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Equilibrar el vial cerrado a temperatura ambiente
El vial sale del congelador frío y cerrado. Abrirlo así hace que la humedad del aire condense sobre el sólido, que es higroscópico. Se deja sobre la mesa, todavía sellado, hasta que la superficie exterior pierde el frío al tacto. Es el paso que más se salta y el que más material arruina.
- 02
Preparar la superficie y el material
Superficie despejada y desinfectada, guantes puestos, y a mano el vial de diluyente, una jeringa estéril de un solo uso y torundas con alcohol. El diluyente habitual para un sólido liofilizado es agua bacteriostática; el volumen que corresponde a cada presentación se decide en el diseño del experimento, no aquí.
- 03
Desinfectar los dos septos
Se limpia el septo de goma del vial de diluyente y el del vial del compuesto con una torunda con alcohol, y se dejan secar al aire. Secar soplando o con papel reintroduce partículas.
- 04
Cargar el diluyente
Se carga el volumen previsto en la jeringa. Conviene purgar el aire antes de perforar el segundo septo: el aire empujado dentro de un vial cerrado sube la presión y luego devuelve líquido por la aguja al retirarla.
- 05
Transferir contra la pared, nunca sobre el sólido
La aguja se inclina para que el chorro caiga sobre la pared interna del vial y baje por ella. Un chorro directo sobre la torta liofilizada la dispersa y favorece la formación de espuma, y la espuma es material en la interfase que ya no está en solución.
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Disolver girando, sin agitar
El vial se gira con suavidad entre los dedos hasta que el sólido desaparece. No se agita, no se sacude y no se pasa por vórtex: la agitación mecánica de una cadena peptídica en solución favorece agregación. Si algo queda sin disolver, se deja reposar unos minutos y se vuelve a girar.
- 07
Inspeccionar y registrar
La solución se mira a contraluz: debe verse límpida y sin partículas. Se etiqueta el vial con compuesto, lote, concentración obtenida y fecha, y se anota en la bitácora. Un vial reconstituido sin etiqueta es material perdido en cuanto hay dos sobre la mesa.
Por qué el material se suministra liofilizado
La liofilización retira el agua por sublimación y deja un sólido poroso. Sin agua libre, las rutas de degradación que necesitan medio acuoso quedan detenidas, y por eso el sólido se conserva mucho mejor que la misma cantidad de material ya en solución.
Esa es también la razón de que la reconstitución sea el momento delicado del manejo: es cuando el material vuelve a un medio donde puede degradarse, y a partir de ahí el reloj corre.
Errores que cuestan el vial
- Abrir el vial todavía frío y dejar que condense humedad sobre el sólido.
- Dirigir el chorro de diluyente sobre la torta en vez de sobre la pared.
- Agitar o pasar por vórtex para «acelerar» la disolución.
- Reutilizar una jeringa entre dos viales distintos.
- No etiquetar la concentración obtenida en el momento, y deducirla después de memoria.
Preguntas frecuentes
- ¿Qué diluyente se usa para reconstituir un sólido liofilizado?
- El diluyente habitual es agua bacteriostática estéril. El volumen concreto depende del diseño del experimento y de la concentración de trabajo que se busque, y se define en el protocolo del laboratorio.
- ¿Por qué no se debe agitar el vial?
- La agitación mecánica somete la cadena peptídica a esfuerzo en la interfase aire-líquido y favorece agregación y formación de espuma. El material atrapado en la espuma deja de estar en solución. Girar el vial con suavidad disuelve igual y sin ese riesgo.
- ¿Cuánto tarda en disolverse?
- Un sólido liofilizado íntegro suele disolverse en menos de un minuto girando el vial con suavidad. Si queda material visible, se deja reposar unos minutos a temperatura ambiente y se vuelve a girar; forzar con agitación no acelera nada y sí introduce riesgo.
Presentaciones del catálogo
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